lundi 6 octobre 2014

§ Comment les êtres vivants utilisent-ils ces molécules ?

1,2,2 - Chemical reactions in vivo : cell metabolism

Métabolisme = ensemble des réactions chimiques ayant lieu dans une cellule, donc un organisme.

A1/ Ensemencement d'euglènes sur différents milieux / culture in vitro

Méthode

La culture in vitro permet de maîtriser un maximum de paramètres variants en milieu naturel. Le milieu de culture doit être stérile pour éviter tout autre organisme vivant se multipliant plus vite (champignons par exemple) de contaminer le milieu. Les résultats sont mesurés en comptant le nombre de cellules par unité de volume.

Attention : La manipulation s’effectue dans les conditions d’asepsie. Il faut donc porter une blouse propre, stériliser ses mains et la paillasse, éviter de parler et de faire des mouvements brusques provoquant des courants d’air non stérile. Le poste de travail est organisé autour d’un bec bunsen qui doit rester allumé en permanence au centre d'une grille de repère qui permet de travailler à 10 – 20 cm de la flamme, dans une zone d'air stérile. Ne pas mettre en contact la pipette avec les milieux de culture, pour cela déposer dans la partie supérieure la suspension de cellules dans les tubes contenant les milieux nutritifs. Ne pas utiliser la même pipette pour ensemencer des cellules différentes.

Objectif : Comprendre que le métabolisme dépend du milieu et des caractéristiques de chaque souche d’Euglène.

Méthode

Stériliser la paillasse et les avant bras à l'eau de javel
placer le bec bunsen au centre de la grille et allumer-le
agiter délicatement le tube d'euglènes E1
prendre 0,5 mL d'euglènes à la pipette stérile et ensemencer le milieu A sans toucher le milieu de culture (vider la pipette contre le bord et non pas dans la solution)
marquer le tube E1A et vos initiales
Séance 1
refaire la même opération avec un milieu B
refaire les mêmes opérations avec les euglènes E2
Refaire l’étape 4 et marquer le tube E1Aobscurité (ce tube sera conservé pendant une semaine à l’obscurité).
Réaliser une comparaison des Euglène A et B :
1. placer une goutte d'euglènes entre lame et lamelle (cf fiche technique)
2. observer au microscope
3. dessiner votre observation, sans oublier titre, légende et grossissement
laisser incuber les 4 tubes une semaine à température et luminosité constante
agiter délicatement chaque tube d'euglènes
prélever une goutte de chaque tube avec des pipettes différentes
Séance 2
lacer chaque goutte dans une cuve de lame KOVA
compter le nombre de cellules par case
déterminer le nombre de cellules par unité de volume en suivant les spécifications données par le fabricant (pour une lame Kova : multiplier le nombre de cellules par carré élémentaire par 90 pour obtenir le nombre de cellules par µL).