SVT TP 1S : Action des UV sur la levure Ade2
Méthode
De
très nombreuses mutations sont connues chez la levure et concernent
principalement leurs capacités métaboliques comme l'auxotrophie
(incapacité d'un organisme vivant de synthétiser un composé
organique nécessaire à son développement) pour diverses
petites molécules (acides aminés, bases azotées ou vitamines) ou
la possibilité d'utiliser divers sucres comme source de carbone. Une
de ces mutations appelée ade2 conduit à l'inactivation
d'une enzyme impliquée dans la biosynthèse de l'adénine. Elle
présente l'intérêt de se traduire par un phénotype visible à
l'œil nu puisque les souches affectées forment des colonies de
couleur rose à rouge dans certaines conditions.
Le principe des manipulations présentées ci-dessous est de provoquer des mutations chez l'une de ces souches. Certaines de ces mutations se traduiront par un retour à la couleur crème habituelle des colonies et seront donc aisément détectables.
Le principe des manipulations présentées ci-dessous est de provoquer des mutations chez l'une de ces souches. Certaines de ces mutations se traduiront par un retour à la couleur crème habituelle des colonies et seront donc aisément détectables.
Matériel
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Par poste
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Par classe
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Méthode
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Désinfection : lavage et passage à l'eau de Javel des paillasses, lavage des mains au savon puis à l'eau de Javel
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Préparation des boîtes de pétri :
- Indiquer au feutre Io pour la boîte non irradiée (témoin) et I pour la boîte irradiée,
- Marquer les temps d'irradiation sur la boîte I ou sur les quatre-quart du couvercle. -
Préparation de la zone stérile : répartition du matériel (30 cm autour de la flamme du bec bunsen ou 15 cm autour du bec électrique) et anticipation des manipulations pour éviter de se retrouver en condition contaminante.
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- Ouverture de l'emballage de la pipette stérile, et prélèvement de 0.1 mL de suspension homogénéisée de levure,
- Déposer la suspension de levure au mileu de la boîte de pétri maintenue entrouverte le moins longtemps possible (en zone stérile),
- Etaler les levures avec l'étaleur en maintenant le couvercle entrouvert jusqu'à ce que la surface soit sèche (pour éviter que les levures coulent). La surface doit être correctement ratissée (sans pénétrer dans la gélose car c'est un phénomène aérobie). -
Irradiation :
- La lampe doit être allumée 30 minutes avant le début de l'irradiation.
- Eteindre la lampe avant d'ouvrir la boîte d'irradiation,
- Placer les boîtes de pétri I sous la lampe;
- Enlever le couvercle pour le placer à côté, à l'envers, afin qu'il reste stérile ou remplacer le couvercle par celui réduit aux trois - quart en le positionnant correctement.
- Refermer la porte et allumer la lampe.
- Refermer la boîte suffisament irradiée.
- Eteindre la lampe, sortir les boîtes et les mettre à incuber à 30°C (couvercle vers le bas) pendant 5 jours puis réserver au frigidaire (toujours couvercle vers le bas).
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